液相色譜基線噪音的改善方法

基線噪音是做液相的同學(xué)經(jīng)常感到頭疼的問題,尤其是在做痕量分析的時候。今天，我們來分析下噪音的來源，以及如何減小和消除噪音。

一、 多種流動相的在線混合

流動相在線混合是為了簡化實(shí)驗(yàn)步驟，流動相混合的不充分是基線噪音的一個重要來源。

流動相混合方式主要兩種：

1.低壓混合：采取時間脈沖的方式，利用比例閥，將不同流動相按一定比例混合。

2.高壓混合：利用多個泵頭，控制每個泵的流量，來將流動相按一定比例混合。

從流動相開始混合在一起，到流動相到達(dá)色譜柱頭，這一段體積叫做延遲體積(Delay Volume)?；旌掀黧w積越大，混合越好，但是相應(yīng)延遲體積就越大，會造成梯度的延遲。換句話說，就是流動相的變化，需要一定時間后，才能真正到達(dá)色譜柱，對分離產(chǎn)生影響。這個現(xiàn)象在使用UPLC或者UHPLC的時候，會有比較明顯的作用。

那如何減小因?yàn)榛旌隙斐傻幕€噪音呢？

1.對于等度的方法：非常簡單，預(yù)混流動相就可以了。

2.對于梯度的方法：部分預(yù)混流動相也會幫助更好的混合，怎么做呢？看下面的例子。

方法要求乙腈/水比例從10%走到85%。那可以將流動相A配成10%的乙腈，流動相B配成85%的乙腈，然后A/B梯度從0%走到100%。這就是部分預(yù)混。

3.增大混合器的體積：一般混合器的體積從幾百ul到幾ml都有，在允許的延遲時間下，更換一個體積更大的混合器，能夠有效提高混合的效率。

二、液相硬件問題造成的基線噪音

如果液相系統(tǒng)某些地方的工作不正常，也可能造成基線的噪音。

1.系統(tǒng)有漏：特別是肉眼無法發(fā)現(xiàn)的微漏或者泵的內(nèi)漏，會造成流速的變化和混合比例的變化，從而導(dǎo)致基線噪音。

檢查的方法就是對系統(tǒng)進(jìn)行壓力測試：將系統(tǒng)從某個地方用死堵堵上，如泵出口，或者自動進(jìn)樣器出口，將壓力升高到350bar后停泵，監(jiān)測壓力下降的情況。一般的標(biāo)準(zhǔn)是2-3bar/min的下降是正常水平?；蛘?5%/10min的下降。

2.梯度比例問題：可以對系統(tǒng)進(jìn)行一個梯度測試，來檢查梯度混合是否準(zhǔn)確和一致。

梯度測試

a.將A配成0.1%的丙酮，B是水。

b.在265nm的波長下，將A的比例從10%，20%，30%這樣一個一個的升高，每個比例走3min。

c.可以根據(jù)計(jì)算，看每個基線臺階上升是否準(zhǔn)確。

d.也可以從0-100%走一個連續(xù)的梯度，看基線上升的平滑性和線性。

三、流動相脫氣不好造成的基線噪音

對流動相進(jìn)行脫氣，不僅僅是為了防止系統(tǒng)里面氣泡的產(chǎn)生。流動相脫氣越好，基線就會越好。

如今最常用的脫氣方式是在線脫氣機(jī)，但是有的時候脫氣并不徹底。所以當(dāng)有基線噪音問題時，可以考慮采取多種脫氣方式。

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