PCR 儀原理及擴(kuò)增的步驟

PCR 儀擴(kuò)增的步驟

首先將模板 DNA 置于 92℃ -96℃，進(jìn)行變性（denaturation）處理，使 dsDNA 在高溫下解鏈成為 ssDNA ，且熱變性不改變其化學(xué)性質(zhì)；

退火（annealing） ，將溫度降至 37℃ -72℃，使引物與模板的互補(bǔ)區(qū)相結(jié)合；

然后，在 72℃ 條件下， DNA 聚合酶將 dNTP 連續(xù)加到引物的 3'-OH 端，合成 DNA ，這個(gè)步驟稱為延伸（extension）。

這三個(gè)熱反應(yīng)過(guò)程的重復(fù)稱為一個(gè)循環(huán)，經(jīng)過(guò) 20-40 個(gè)循環(huán)可擴(kuò)增得到大量位于兩條引物之間序列的 DNA 片段。

PCR 儀工作原理：

基本要素與DNA復(fù)制的基本要素是一致的。待拷貝的 DNA 稱為模板，它可以是雙鏈 DNA 也可是單鏈DNA，結(jié)果擴(kuò)增得到的產(chǎn)物是雙鏈狀態(tài)的。引物是 DNA 復(fù)制的先鋒，就象結(jié)晶過(guò)程中的晶核，引導(dǎo) DNA 的合成。在 PCR 擴(kuò)增中一般使用合成的寡核苷酸作引物。DNA 聚合酶是 DNA 復(fù)制的動(dòng)力，在 dNTP 等底物存在時(shí)在引物的引導(dǎo)下沿著模板 DNA 合成互補(bǔ)的 DNA 鏈。