高效液相色譜（2）-島津LC—20AT型高效液相色譜儀操作規(guī)程

一、 流動(dòng)相及樣品的準(zhǔn)備

1、流動(dòng)相的選擇，有機(jī)溶劑必須是色譜級(jí)，水必須是超純水或二次蒸餾水。

2、流動(dòng)相用0.45μm孔徑的濾膜過(guò)濾（水和有機(jī)相所用的濾膜不同，有機(jī)相用

F膜，水相用水膜），超聲脫氣后置于儲(chǔ)液瓶中。

3、根據(jù)待檢測(cè)樣品的需要更換合適的色譜柱。

4、樣品溶液亦必須用0.45μm的微孔濾膜過(guò)濾后才能進(jìn)樣。

二、 開(kāi)關(guān)機(jī)順序

1、 開(kāi)機(jī)順序：先打開(kāi)泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、檢測(cè)器電源，再打開(kāi)系統(tǒng)控制器的電源，點(diǎn)擊電腦中的Lc-solution工作站聯(lián)機(jī)，連上后能聽(tīng)到兩次“嘀”的聲音。

2、 關(guān)機(jī)順序：與開(kāi)機(jī)順序相反，即先關(guān)閉Lc-solution工作站→系統(tǒng)控制器→泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、檢測(cè)器。

3、 待設(shè)備自檢結(jié)束后，打開(kāi)儀器對(duì)輸液泵及自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)行必要的Purge操作，排出相應(yīng)流路中的氣泡，使新鮮溶劑在流路中得以置換；檢查輸液泵在動(dòng)作前的壓力顯示值，必要時(shí)對(duì)此壓力值進(jìn)行調(diào)零 。

三、 LC-solution 操作界面的進(jìn)入及系統(tǒng)的開(kāi)啟

1、 雙擊桌面上Lc-solution圖標(biāo)，選擇屏幕左側(cè)“操作”項(xiàng)并單擊，在彈出的窗口中雙擊操作儀器所對(duì)應(yīng)的圖標(biāo)，彈出窗口后輸入用戶名ID及密碼，按“確定”進(jìn)入儀器實(shí)時(shí)分析界面 。

2、 點(diǎn)擊助手欄中的“儀器參數(shù)”進(jìn)入儀器參數(shù)設(shè)置界面，設(shè)置采樣時(shí)間，流動(dòng)相流速及配比，檢測(cè)波長(zhǎng)，柱溫等。在完成后點(diǎn)擊“下載”將分析參數(shù)傳輸至主機(jī)。

3、 分析方法的保存：選擇文件→另存方法文件為→選擇保存路徑→取名保存文件。該方法即作為當(dāng)前運(yùn)行的方法。

4、 打開(kāi)儀器上的排空閥（逆時(shí)針?lè)较蛐D(zhuǎn)180°），點(diǎn)擊儀器面板上“purge”

按鈕開(kāi)始清洗5個(gè)流路3分鐘。

5、 系統(tǒng)的啟動(dòng)：點(diǎn)擊“儀器開(kāi)/關(guān)”鍵開(kāi)啟系統(tǒng)（此時(shí)泵開(kāi)始工作）

四、 進(jìn)樣準(zhǔn)備及單次進(jìn)樣分析

1、 將樣品瓶放入自動(dòng)進(jìn)樣器中

2、 觀察基線及柱壓，待基線平直（-5~30mv），壓力穩(wěn)定（0.5Mpa）時(shí)方可進(jìn)樣。

3、 點(diǎn)擊助手欄中“單次分析” 鍵，出現(xiàn)采樣對(duì)話框。 在對(duì)話框中輸入“ 樣品名稱”，“樣品信息”，“方法文件名”，“數(shù)據(jù)文件名”，“樣品瓶號(hào)”，“樣品架號(hào)”，“ 進(jìn)樣量”等樣品參數(shù)。

4、 填完后點(diǎn)擊“確定”鍵，儀器開(kāi)始自動(dòng)進(jìn)樣操作。

五、 批處理分析

1、點(diǎn)擊批處理分析圖標(biāo)，點(diǎn)擊助手欄中的“向?qū)?rdquo;。編輯方式為新建或添加，方法文件默認(rèn)為當(dāng)前方法，可根據(jù)需要選擇相應(yīng)方法。

2、根據(jù)提示逐步輸入“開(kāi)始樣品編號(hào)”、“進(jìn)樣體積” →“樣品組數(shù)” →標(biāo)準(zhǔn)樣品“數(shù)據(jù)文件路徑、名稱”、“校正級(jí)別數(shù)”、“重復(fù)進(jìn)樣次數(shù)”未知樣品的信息。填寫(xiě)后“完成”。

3、保存批處理文件：文件→批處理文件另存為→路徑、名稱→保存。

4、啟動(dòng)批處理：儀器處于“就緒”狀態(tài)后點(diǎn)擊助手欄中的開(kāi)始批處理，開(kāi)始運(yùn)行。

六、 數(shù)據(jù)文件的查看及定量分析（外標(biāo)法為例）

1、 點(diǎn)擊助手欄中的“再解析”鍵，點(diǎn)擊“PDA數(shù)據(jù)分析”打開(kāi)數(shù)據(jù)處理窗口。

2、 打開(kāi)文件收索器，定位至數(shù)據(jù)文件所在的文件夾，選擇文件的類型，雙擊文件名即可打開(kāi)數(shù)據(jù)文件（此時(shí)可以查看峰面積、保留時(shí)間等參數(shù)）。

3、 點(diǎn)擊助手欄中的向?qū)В鸩教顚?xiě)相關(guān)信息直至完成。

4、 另存方法文件為→對(duì)話框選擇“是” →選擇保存路徑和名稱→點(diǎn)擊“確定”。

5、 關(guān)閉當(dāng)前數(shù)據(jù)文件并保存。

6、 單擊左側(cè)助手欄中的“LC數(shù)據(jù)分析圖標(biāo)” →在數(shù)據(jù)瀏覽器中找到要計(jì)算的數(shù)據(jù)文件并“打開(kāi)”

7、 文件→加載方法參數(shù)→選擇以保存的方法文件，打開(kāi)→對(duì)話框中選擇“是”，計(jì)算完畢。

七、 數(shù)據(jù)文件中報(bào)告預(yù)覽和打印

1、 報(bào)告模板的制作：點(diǎn)擊 Top 返回上級(jí)引導(dǎo)操作欄，助手欄中點(diǎn)擊“再解析”

—“PDA數(shù)據(jù)分析”—“數(shù)據(jù)報(bào)告” 進(jìn)入報(bào)告界面。

2、 調(diào)入報(bào)告格式文件，用鼠標(biāo)將報(bào)告格式文件拖拽到右側(cè)報(bào)告欄內(nèi)即可。

3、 報(bào)告格式的制定和修改，可以通過(guò)點(diǎn)擊“樣品信息”、“方法信息”、“LC/PDA色譜圖”、“LC/PDA校正曲線”、“LC/PDA峰表” “LC/PDA結(jié)果”等內(nèi)容圖標(biāo)，拖拽鼠標(biāo)到報(bào)告中確定位置，即可依次加入相應(yīng)的統(tǒng)計(jì)信息。

4、 報(bào)告模板保存：文件—另存報(bào)告格式文件—Lc-solution路徑—文件名—保存。

5、 數(shù)據(jù)的打印：在文件收索器中選擇欲打印的數(shù)據(jù)文件，拖拽至報(bào)告模板中，

然后點(diǎn)擊助手欄中的打印按鈕即可。

九、實(shí)驗(yàn)結(jié)束

1、實(shí)驗(yàn)結(jié)束，用甲醇沖洗泵30min（若實(shí)驗(yàn)時(shí)用酸或緩沖鹽做流動(dòng)相時(shí)，先用

純水先沖洗泵60min,然后用甲醇沖洗泵30min）。

2、點(diǎn)擊“儀器開(kāi)/關(guān)”鍵，停泵，待泵的壓力下降到0.5Mpa以下，按關(guān)機(jī)順序

關(guān)閉儀器電源 。

3、清洗工具，打掃實(shí)驗(yàn)室，填寫(xiě)《大型精密儀器設(shè)備使用記錄表》。